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              細胞培養中常見的真菌污染源分析

              2023-10-12 10:37 來源:上海遠慕生物試劑

              培養基變渾濁的原因可能有如下幾點:

              1、細胞存在污染,污染早期可以見到細胞生長;

              2、不排除傳代時細胞密度過大,或者操作不當導致多數細胞不貼壁,大量細胞漂浮。

              3、細胞破碎。

              細胞培養中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染.他們在細胞培養中污染的特點如下:

              1、細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯.

              2、支原體:黑色的,好象多為多形,培養液一般培養液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見的微生物之一.而且它不能用過濾的辦法除去.支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去.

              3、黑膠蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的.常常是細胞生長狀態良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象.對細胞生長狀態不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理.

              4、真菌:一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物.真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了.

              5、原蟲:培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮.他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養.這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,最終形成惡性循環.

              6.病毒:組織細胞培養過程中,如果沒有除去潛在的病毒,就會產生病毒污染.目前,從原代猴腎細胞的培養中已發現不少于20種血清性病毒.盡管病毒污染的細胞不影響原代培養,但生產疫苗是不安全的.因此,潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題 。

              7、非同種細胞污染 :即是細胞交叉污染,由于細胞培養操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染.目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效.非細胞培養物所造成的化學成分的污染也偶有發生,大多是由于細胞培養所需物品清洗消毒不徹底而帶入一些有毒化學物質所致.
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